下一代測序(NGS)技術使快速讀取(qu)患者DNA中成(cheng)千上(shang)萬的(de)堿基序列成(cheng)為了(le)(le)可能，NGS的(de)快速崛(jue)起(qi)為遺傳診斷開啟了(le)(le)一個嶄新的(de)時代。然而(er)，新技術的(de)發(fa)展也帶來(lai)了(le)(le)巨大的(de)挑戰，包括技術水平(ping)、數(shu)據(ju)管理(li)和檢測結果(guo)的(de)解釋(shi)與咨詢三方面帶來(lai)的(de)挑戰。將NGS數(shu)據(ju)應用(yong)于診斷領(ling)域之前，尚且還有很多問題需要(yao)解決。
在(zai)這種(zhong)背景下，EuroGentest和歐盟人(ren)類遺傳(chuan)學(xue)會對基于NGS的(de)(de)遺傳(chuan)病(bing)診斷進行評估和驗證(zheng)，并制定了NGS診斷指(zhi)南。該(gai)指(zhi)南經過實驗室(shi)遺傳(chuan)學(xue)家(jia)、生物信(xin)息(xi)學(xue)家(jia)、臨(lin)床遺傳(chuan)學(xue)家(jia)、企(qi)業界和患(huan)者(zhe)代表及其(qi)他人(ren)類遺傳(chuan)領域相關人(ren)員的(de)(de)共同討(tao)論，最終由(you)實驗室(shi)遺傳(chuan)學(xue)家(jia)和生物信(xin)息(xi)學(xue)家(jia)制定。該(gai)指(zhi)南可(ke)做(zuo)為補(bu)充材料，幫助診斷實驗室(shi)有效應用NGS技術并指(zhi)導NGS的(de)(de)資質認證(zheng)。
該(gai)指(zhi)(zhi)南主要(yao)(yao)針(zhen)對罕(han)見(jian)病和單基因(yin)(yin)疾(ji)病的(de)NGS診斷，主要(yao)(yao)專注(zhu)于(yu)基因(yin)(yin)panels的(de)靶向(xiang)分析(xi)、特(te)定(ding)的(de)捕獲(huo)分析(xi)以及從(cong)全外顯(xian)子(zi)測序中(zhong)提取可用數據。理論上或許很快就能從(cong)全基因(yin)(yin)組測序中(zhong)提取類似的(de)信息，在(zai)這種情況下，該(gai)指(zhi)(zhi)南將仍適用，但由于(yu)全基因(yin)(yin)組測序還(huan)能檢(jian)測到其他疾(ji)病的(de)分子(zi)特(te)性，因(yin)(yin)此測序深度應當(dang)相(xiang)應延長(chang)。該(gai)指(zhi)(zhi)南涵蓋了(le)過去(qu)幾年(nian)關于(yu)NGS的(de)指(zhi)(zhi)導方針(zhen)，但比舊(jiu)版多了(le)一些(xie)新見(jian)解，其中(zhong)最重要(yao)(yao)的(de)新特(te)性是NGS診斷測試的(de)“評價(jia)系(xi)統”。
該指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)在(zai)三次NGS與診(zhen)(zhen)斷的(de)(de)重大討論會(hui)中生成。第(di)一次研討會(hui)于(yu)2013年(nian)2月(yue)(yue)25日-26日在(zai)比(bi)利Leuven舉行，2013年(nian)3月(yue)(yue)7-8日在(zai)EuroGentest科(ke)學大會(hui)上NGS指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)初步(bu)意見(jian)形成;第(di)二(er)次討論會(hui)于(yu)2013年(nian)10月(yue)(yue)1日-2日在(zai)Leuven舉行，主(zhu)要對NGS診(zhen)(zhen)斷指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)進行編(bian)寫，2013年(nian)11月(yue)(yue)21日-22日在(zai)Nijmegen敲定該指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan);第(di)三次討論會(hui)中，邀請了更多(duo)的(de)(de)相關人員參與，他們被邀請對指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)進行評論并作評述(shu)報(bao)告，指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)出版前遞交歐(ou)洲人類遺傳學董事會(hui)審核，最終該指(zhi)(zhi)(zhi)南(nan)(nan)于(yu)2015年(nian)7月(yue)(yue)正(zheng)式(shi)通過(guo)審批并刊出，并獲得了基因診(zhen)(zhen)斷聯盟(meng)的(de)(de)高(gao)度(du)稱贊，對歐(ou)洲NGS診(zhen)(zhen)斷產業的(de)(de)質量監(jian)督有重要意義。
該指南從目(mu)前發展(zhan)水平、診斷/臨床(chuang)的(de)效(xiao)用、知情(qing)同意書(shu)及(ji)對患者和醫生的(de)通知、驗證、報告(gao)、研(yan)究(jiu)與診斷之間的(de)區別六個(ge)方向(xiang)做了38個(ge)聲(sheng)明，并發表于《歐洲人類遺傳學雜志》上。
一、目前發展水平
從某種意義上說，由于(yu)技術發展(zhan)迅(xun)猛(meng)導致了(le)NGS平臺(tai)出現(xian)不(bu)(bu)穩定的現(xian)狀。然而，這不(bu)(bu)能(neng)作為阻(zu)止(zhi)NGS應用(yong)(yong)于(yu)診斷(duan)領域(yu)的理由，因(yin)為NGS給患者帶來了(le)潛在的利益。阻(zu)止(zhi)NGS過早(zao)用(yong)(yong)于(yu)診斷(duan)的原(yuan)因(yin)只(zhi)能(neng)是其質量差，未通過驗(yan)證就進入(ru)臨床(chuang)診斷(duan)對患者而言(yan)具有威脅性，同時也是不(bu)(bu)可接(jie)受的。
聲明1：未根據最新指南要求進行可接受性驗證測試，NGS不應進入臨床實踐中。
診(zhen)斷測試(shi)的(de)目的(de)是(shi)排除(chu)還是(shi)確認診(zhen)斷應事(shi)先定義好，因為(wei)排除(chu)和(he)確診(zhen)的(de)區別很(hen)重要(yao)，這種區別主(zhu)要(yao)取決于測試(shi)的(de)完整性和(he)授權性，不(bu)僅(jin)僅(jin)涉及測試(shi)技術的(de)不(bu)同(tong)(tong)設置還包括診(zhen)斷的(de)不(bu)同(tong)(tong)意見(jian)。
聲明2：實驗室必須確定即將進行的測試是用于排除診斷還是證實診斷。
二、診斷/臨床的效應
NGS應用于診斷領域最大的(de)優勢是(shi)可在(zai)相(xiang)對(dui)短的(de)時間內和相(xiang)對(dui)低的(de)成本下(xia)檢測(ce)多個基因，從而得(de)出更(geng)多的(de)分(fen)子診斷信息。NGS的(de)局限性(xing)在(zai)于其對(dui)平臺(tai)及濃縮(suo)方(fang)法(fa)的(de)依賴，且一直以(yi)來認為(wei)濃縮(suo)方(fang)法(fa)和測(ce)序平臺(tai)容易受(shou)影(ying)響(xiang)，因而額外的(de)測(ce)試對(dui)高(gao)質量診斷來說很重要。
聲明3：測試或分析的目的和實用性必須在驗證起始時進行討論，且驗證報告中應包括摘要總結。
診斷的效率必須明確，因(yin)為(wei)致(zhi)病(bing)變異的概(gai)率被標識了才(cai)能做(zuo)出(chu)相(xiang)應的分子診斷。這個概(gai)率值(zhi)由病(bing)人群為(wei)單位進(jin)行計算(suan)，從臨床角度確定(ding)了NGS的性能，是反(fan)應測試效率和臨床應用(yong)的很好指標。
聲明4：當診斷實驗室考慮引進NGS監測時，首先必須考慮它的診斷效率。
在(zai)(zai)實踐(jian)中，診斷實驗室將(jiang)提供更好的(de)基因(yin)panels，在(zai)(zai)開發診斷測試時必須(xu)確定將(jiang)一(yi)個基因(yin)移植到(dao)panels上所需的(de)條(tiao)件。在(zai)(zai)理想情況下，該問題應以(yi)多學科的(de)方式進行(xing)一(yi)級處理，目標是編(bian)譯用于診斷的(de)基因(yin)列表。
聲明5：出于診斷目的，只有異常基因型和與病理相關的已知基因(發表或證實過的)才能納入分析中。
一直以(yi)(yi)來人們都將與身理缺(que)陷(xian)相關基(ji)因(yin)(yin)稱為“核心(xin)基(ji)因(yin)(yin)”，從Sanger技(ji)術(shu)發展NGS技(ji)術(shu)，測序的(de)靈敏(min)度不(bu)應(ying)降低。例如BRCA1和BRAC2基(ji)因(yin)(yin)，Sanger測序技(ji)術(shu)結(jie)合(he)缺(que)失(shi)/重復分析可(ke)使靈敏(min)度達99%，以(yi)(yi)此類推(tui)該方法對(dui)其他(ta)基(ji)因(yin)(yin)的(de)診斷效(xiao)率也(ye)應(ying)該很(hen)高(gao)。理論上增加(jia)其他(ta)基(ji)因(yin)(yin)的(de)檢(jian)測會增加(jia)診斷率，但不(bu)應(ying)以(yi)(yi)犧(xi)牲原有的(de)突變檢(jian)測為代價。檢(jian)出率的(de)提(ti)高(gao)是決定核心(xin)基(ji)因(yin)(yin)檢(jian)測列表和處理缺(que)口的(de)關鍵因(yin)(yin)素。
聲明6：出于比對，為了避免不負責任的測試，為了患者的利益，“核心疾病基因列表”應由臨床和實驗室專家制定。
若不(bu)考慮本(ben)指(zhi)南，實驗室可用不(bu)同參數的(de)NGS檢(jian)測(技術和診斷)。事實上，有太多的(de)變量無法通過固定的(de)指(zhi)南來(lai)指(zhi)導(dao)檢(jian)測。因此我們為NGS檢(jian)測提(ti)(ti)出(chu)一個簡單的(de)評(ping)分系統，該系統可公平打分并(bing)對不(bu)同實驗室提(ti)(ti)供的(de)NGS檢(jian)測進行簡單比對。
A類(lei)檢測(ce)：實驗(yan)室保證(zheng)編碼區和內含子(zi)區序列的(de)可靠內參或識別變體大于99%，并(bing)用(yong)(yong)Sangger測(ce)序(或其(qi)他互(hu)補的(de)測(ce)序分(fen)析)進行(xing)缺口填補，根據所使(shi)用(yong)(yong)的(de)平臺，選擇額外的(de)分(fen)析，如進行(xing)均(jun)聚物延伸(shen)的(de)分(fen)析。
B類檢測(ce)：實驗(yan)室(shi)能正確描述哪些區域能在可(ke)靠內參或(huo)識別(bie)變體大于99%的條件下測(ce)序，并用Sangger(或(huo)其他)測(ce)序方法進(jin)行缺口填(tian)補。
C類(lei)測(ce)試(shi)(shi)(shi)：C類(lei)測(ce)試(shi)(shi)(shi)僅僅基于NGS的試(shi)(shi)(shi)驗，沒(mei)有額(e)外(wai)的Sangger(或其他)測(ce)序試(shi)(shi)(shi)驗。
聲明7：簡單的評分系統基于檢測覆蓋面和診斷率，可對不同實驗室提供的檢測進行比較。
三(san)、知(zhi)(zhi)情同(tong)意(yi)書及對(dui)患(huan)者和(he)醫生的(de)通(tong)知(zhi)(zhi)
基于NGS的(de)診斷取(qu)決于實驗室(shi)所(suo)用的(de)程序、平臺、數據過濾和數據儲存。至關重(zhong)要(yao)的(de)是，咨詢醫生應(ying)當被完全(quan)告(gao)知檢(jian)測的(de)局限性(xing)及檢(jian)測可(ke)能出現的(de)不良影響。
聲明8：實驗室提供的每個NGS檢測應明確以下幾點：明(ming)確(que)(que)目標疾(ji)病，明(ming)確(que)(que)所檢測的(de)(de)基因(yin)(yin)名稱，明(ming)確(que)(que)可報告(gao)范圍，明(ming)確(que)(que)分析敏感度和特(te)異性，如果可以，還(huan)應明(ming)確(que)(que)與臨床表(biao)型(xing)無關但與所檢測的(de)(de)基因(yin)(yin)相關的(de)(de)疾(ji)病。
NGS診斷的(de)應用性(xing)主要依賴于(yu)直觀(guan)結(jie)果(guo)和二次結(jie)果(guo)。盡管直觀(guan)結(jie)果(guo)可(ke)從與檢(jian)測(ce)疾(ji)病(bing)相關的(de)基因信息(xi)中(zhong)獲(huo)得，但二次結(jie)果(guo)卻隱(yin)藏在與檢(jian)測(ce)疾(ji)病(bing)無關的(de)疾(ji)病(bing)基因中(zhong)。
聲明9：診斷實驗室的分析途徑應聚焦于處于調查研究中的基因pannel以避免二次結果的發生，并進行相應的驗證。
直觀結(jie)果(guo)在基(ji)(ji)因(yin)pannel中的概率很低(di)，一般依賴于疾病基(ji)(ji)因(yin)。然而，檢測結(jie)果(guo)還有(you)可(ke)(ke)能反映(ying)出隱性雜合突變，根據此還可(ke)(ke)判(pan)斷疾病的攜帶狀況。這將對后(hou)續(xu)的咨詢、生育(yu)選擇(ze)等產生影響。
聲明10：實驗室應該提供直觀結果的信息。
在執行NGS診(zhen)斷(duan)檢(jian)測(ce)之前，臨床(遺傳)中心需(xu)要建立一(yi)個“直(zhi)觀(guan)結果和二次結果的協議(yi)”，該協議(yi)必(bi)須與倫理(li)委員會(hui)的意見相符，應(ying)明(ming)確(que)——在實(shi)驗室、研究所或國家層面上——除了(le)最初(chu)的診(zhen)斷(duan)結果，患者對檢(jian)測(ce)出來的額外結果的告知是否有選擇(ze)決(jue)定權，還(huan)應(ying)詳細說明(ming)檢(jian)測(ce)直(zhi)觀(guan)結果與疾病攜帶狀況是否出現在檢(jian)測(ce)報告中。實(shi)驗室必(bi)須確(que)保(bao)能妥(tuo)善管(guan)理(li)協議(yi)中的每一(yi)條選項(xiang)。
聲明11：關于與目標疾病無關的其他疾病攜帶狀態和二次結果是否被告知的選項協議，如果臨床中心或實驗室決定為(wei)患者(zhe)提(ti)供，那么該協議應該包含所(suo)有的邏輯性。
此外(wai)，檢測前遺(yi)傳咨(zi)詢是必要的，且應包括預期結果(guo)和(he)潛在(zai)的直(zhi)觀結果(guo)與二次(ci)結果(guo)的討論，并提供足夠的信息。
聲明12：應讓患者清楚當地對直觀結果與二次結果的管理政策。
聲明13：建議給患者提供一份書面說明書或在線可用信息說明。
四、驗證
樣品(pin)的(de)質量(liang)與許多(duo)參數有關，包(bao)括數據(ju)的(de)產量(liang)、PCR拷貝和覆蓋的(de)比例(li)。在診斷設置中，只有好的(de)樣本才(cai)是必(bi)須分析的(de)，因此對(dui)高(gao)質量(liang)的(de)目標(biao)基因pannel、外顯(xian)子或基因組的(de)標(biao)準定義十分必(bi)要。
聲明14：應準確描述診斷程序中所有的NGS質量測量指標。
NGS技術要求監測(ce)(ce)特(te)定的run和特(te)定分(fen)析/樣本的特(te)性。監測(ce)(ce)數據無需做成報告但(dan)可用于后續的驗證。
聲明15：診斷實驗室應對平臺、所有的分析和所有的樣本設置一個相關質量度量結構化數據庫。
由于(yu)NGS工作流程非常(chang)復雜，因此(ci)應建立樣本的追蹤方法(fa)，包括在實驗室和計算分析中實施并聯法(fa)。
聲明16：在評估分析處理中包括平臺驗證過程應建立樣本追蹤方法和設置樣本識別條形碼。
在平(ping)臺驗(yan)證過程中(zhong)(zhong)，實驗(yan)室必(bi)須(xu)(xu)確保所有的(de)設(she)備和試劑都與制造商的(de)要求相(xiang)符(fu)。必(bi)須(xu)(xu)明確每種技術的(de)局限性，并在開發(fa)測試和數據分析中(zhong)(zhong)將(jiang)其考慮在內。實驗(yan)室必(bi)須(xu)(xu)能區分附屬于(yu)平(ping)臺、特殊(shu)檢測或分析流程的(de)特性。
聲明17：平臺驗證應包括精準度和精密度，且通過驗證的平臺工作結果無需其他方法來重復驗證。
顯然每種測(ce)序技術都存(cun)在著(zhu)優缺點，生物信息學工具必須能反映這些特征。
聲明18：生物信息學流程必須針對所使用的技術平臺。
在流程的驗證期(qi)間，診斷規(gui)范必須通過(guo)敏感和(he)特性的分析評(ping)估(gu)。例(li)如(ru)，SNP檢(jian)測(ce)最佳化的算法對(小片段)插(cha)入/刪(shan)除的檢(jian)測(ce)準(zhun)確(que)性不高。實(shi)驗室必須證實(shi)意識到這些(xie)特性以及所使用(yong)的變異檢(jian)測(ce)流程能滿足當(dang)前診斷分析。
聲明19：在不同的流程驗證中，必須為每種類型的變異建立敏感性和特異性分析。
任何化(hua)學(xue)成(cheng)分的改(gai)變、濃縮方法或生物信息學(xue)分析平臺應該(gai)保證后續的有(you)效性(xing)。
聲明20：診斷實驗室必須驗證所有的生物信息學流程(公用工具或商業軟件包)的標準信息設置，以確保相關數據更改后(新版本)及時跟進。
包含所有相關變(bian)異的(de)本(ben)地(di)數(shu)(shu)(shu)據庫提(ti)供了(le)識別特定(ding)工作平臺(tai)的(de)工件(jian)、跟蹤驗證結果、提(ti)供特異性位(wei)點數(shu)(shu)(shu)據和(he)meta-分析交換代理(exchange proxy)的(de)重要工具。通常這(zhe)個(ge)數(shu)(shu)(shu)據庫應允許(xu)進一步注釋(shi)(假(jia)陽性、已知突變(bian)、隔離變(bian)體等(deng))，這(zhe)將大(da)大(da)簡化診斷過(guo)程。
聲明21：診斷實驗室應使用當前注釋相關變異體的結構化數據庫。
數據存儲(chu)應使用標準的開(kai)放性(xing)格式(shi)如(ru)FASTQ、BAM或(huo)VCF，這些格式(shi)的數據可與其他實驗(yan)室(shi)共(gong)享。當存儲(chu)分析結(jie)果時，應額外保(bao)存完(wan)整(zheng)的日志文件。日志文件應盡可能完(wan)整(zheng)以保(bao)證FASTQ數據轉換為(wei)整(zheng)個診(zhen)斷報告的可復寫性(xing)。遺憾的是，關于(yu)如(ru)何(he)存儲(chu)目前(qian)國(guo)際上還沒有共(gong)識(shi)。然而，存儲(chu)必須符(fu)合國(guo)家的需求和常(chang)識(shi)。
聲明22：診斷試驗必須對所有相關數據的長期存儲采取相應措施。
在啟動(dong)任何試(shi)驗之前，必須確(que)定好臨床(chuang)目標(biao)(包括編碼區(qu)和保守的(de)剪接位點(dian))，臨床(chuang)目標(biao)取(qu)決于診(zhen)斷測試(shi)與所定義的(de)基因pannel。
聲明23：可報告范圍必須在測試開發過程中確定，且對臨床醫生具有可用性(報告或傳達數字)。
聲明24：“可報告范圍”的要求取決于診斷分析的目的。
例如，外顯(xian)子測(ce)序(xu)分(fen)析(xi)(xi)的(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)是(shi)獲得高(gao)效率(lv)的(de)(de)(de)診斷(duan)，不(bu)需(xu)要(yao)(yao)(yao)進行額外分(fen)析(xi)(xi)來獲取所(suo)有基因組所(suo)覆蓋(gai)的(de)(de)(de)信息，但需(xu)要(yao)(yao)(yao)與(yu)臨(lin)床醫生清晰溝通這(zhe)種(zhong)測(ce)試(shi)方(fang)法不(bu)能(neng)用于排除特定的(de)(de)(de)臨(lin)床診斷(duan)。診斷(duan)測(ce)試(shi)必須進行準(zhun)(zhun)確性(xing)、靈敏性(xing)和特異性(xing)的(de)(de)(de)分(fen)析(xi)(xi)評(ping)估。原則上，這(zhe)些評(ping)估并不(bu)是(shi)新穎的(de)(de)(de)，且被認為很麻煩，但ISO標(biao)準(zhun)(zhun)對其(qi)的(de)(de)(de)要(yao)(yao)(yao)求(qiu)十分(fen)嚴格。
聲明25：當測試發生重大變化時，必須對質量參數進行檢查，且必須重新上樣檢測。實驗室應事先定義好當測試方法更新或升級后哪種類型的樣本要重新分析及分析次數。
五、報告
NGS檢測結(jie)果(guo)報(bao)告(gao)的(de)清晰性和一致性至關重(zhong)要，因為實(shi)驗室(shi)的(de)報(bao)告(gao)可能被(bei)專(zhuan)家和非專(zhuan)家閱(yue)讀。從實(shi)用的(de)角(jiao)度來看，臨床上的(de)重(zhong)要結(jie)論、相關測試(shi)和測試(shi)質量數據應(ying)寫在報(bao)告(gao)的(de)首頁。
聲明26：NGS的分析報告應該對患者的鑒別診斷進行總結，簡要描述測試，總結結果，將主要結果放于報告首頁。
所有致病(5類(lei))或(huo)可能致病(4類(lei))的(de)變異(yi)必須包含在(zai)報(bao)告(gao)中，由當地(di)政策決定是否(fou)報(bao)告(gao)未分類(lei)的(de)變異(yi)(UVs-3類(lei))，且實驗室科學(xue)家及(ji)臨床醫生必須清(qing)楚UVs-3類(lei)。
聲明27：關于基因變異報告的當地政策(符合國際建議)應由實驗室在分析之前建立和制定。
聲明28：必須收集UVs數據，最終目的是將這些變異體進行分類。
需發起收集和(he)分享可用信息的(de)群(qun)體活(huo)動，最終目的(de)是將變(bian)異體絕對分類(lei)為(wei)致病性(xing)(5類(lei))或(huo)良性(xing)(1類(lei))。被實(shi)驗室或(huo)研究所采納的(de)與直接結果(guo)和(he)二次結果(guo)相關的(de)政策必須(xu)體現在實(shi)驗室的(de)實(shi)踐和(he)報告(gao)中。
聲明29：在啟動檢測之前，實驗室應有一個關于訪問直接結果和二次結果的明確協議。
診(zhen)斷實驗室(shi)不應該因(yin)舊數(shu)據的分(fen)析請(qing)求而超載。診(zhen)斷請(qing)求應是(shi)包含合適(shi)時間(jian)與合適(shi)地點(dian)的合同，診(zhen)斷試驗只能在(zai)給(gei)定的時間(jian)提供已知(zhi)的和(he)經(jing)過驗證(zheng)的信息(xi)。
聲明30：一般情況下實驗室不會系統性地重分析舊數據并生成新報告，即使與疾病相關的核心基因發生了變化。
但(dan)在特殊情形下(該(gai)情形由疾(ji)病的實驗室或(huo)社區專家決定，如變體類型發生變化時(shi))，實驗室有(you)責任重新分(fen)析(xi)數據，在新證據的基礎上(shang)生成新報告，并重新聯(lian)系(xi)(xi)相(xiang)關臨床醫生和患(huan)者，告知變異(yi)新狀態可(ke)能帶來(lai)的影響，這種情況下，建(jian)立病人與(yu)變異(yi)體的有(you)效(xiao)連接系(xi)(xi)統(tong)十(shi)分(fen)有(you)必要，該(gai)系(xi)(xi)統(tong)在變異(yi)體重新分(fen)類時(shi)可(ke)對受影響病例進行檢(jian)索。
聲明31：為了管理疾病變異體，實驗室必須建立本地變量數據庫，為不同疾病的檢測提供臨床依據。
六、研究和診斷之間的區別
隨著全基因(yin)組測序(xu)在研(yan)(yan)究(jiu)和(he)診斷領(ling)域的(de)(de)可(ke)能性增加，兩(liang)者之間的(de)(de)界線也(ye)越來越模糊，因(yin)此(ci)描述對患者診斷數(shu)據的(de)(de)用途以及確定(ding)特定(ding)類型(xing)的(de)(de)分析研(yan)(yan)究(jiu)是必要的(de)(de)。然而(er)，這(zhe)并不排(pai)除對診斷結果進一步研(yan)(yan)究(jiu)的(de)(de)建議(yi)，但研(yan)(yan)究(jiu)與診斷之間的(de)(de)區(qu)別必須時(shi)刻保持清晰(xi)。
聲明32：任何診斷測試都是為了回答與患者醫療條件相關的臨床問題。
聲明33：研究測試是一種驅動假設，結果可能僅限于參與研究的患者的臨床效應。
聲明34：通過分析外顯子或基因組得出的診斷測試結果可假設生成。
在診(zhen)斷(duan)(duan)過程中，使用(yong)NGS技術獲得的(de)外顯子(zi)測序和基因(yin)組數據(ju)是可(ke)以接受(shou)的(de)，如果(guo)目標是獲得一個遺傳診(zhen)斷(duan)(duan)那么檢測將局限(xian)于與該疾病相關的(de)已知基因(yin)。
聲明35：當以單一患者的診斷為的目的診斷檢測應在獲認可的實驗室中進行。
當參(can)與一個研究項目時，患(huan)(huan)者(zhe)及其(qi)家庭必須意識到這個項目可能(neng)會披(pi)露其(qi)遺傳性疾(ji)病的信息。在研究中(zhong)，臨床相關的結果必須在診斷確定后才能(neng)納入患(huan)(huan)者(zhe)的醫療記錄中(zhong)。
聲明36：研究結果必須在通過認證的實驗室確定后方可轉移至患者身上。
大多數實驗室都建立(li)本地測序/分析樣本變異頻率數據(ju)庫以便易于進(jin)行變異解釋。這類數據(ju)庫不包含任何敏感的(de)信息(xi)。出于隱私原則(ze)考慮，不掂(dian)量這些數據(ju)對診斷和(he)醫療改善的(de)重要性。
聲明37：所有來自健康個體的診斷測試或研究測試的變異頻率都應共享。
理(li)想情況下，疾(ji)病(bing)檢測中(zhong)所有與基因相(xiang)關(guan)的變體(ti)應該提交至致病(bing)性變異數據(ju)庫(ku)，并與患者的臨床數據(ju)相(xiang)結合。用于變異體(ti)分類的標準和參數應清(qing)楚描述(shu)。
