液(ye)相色(se)譜儀是(shi)藥物分析(xi)工作者最常用(yong)的(de)“一門武器”。從業者深感(gan)何(he)時能將液(ye)相做(zuo)到有“打dota”感(gan)覺時，便是(shi)到了(le)游刃有余、駕輕就熟的(de)境界。現今(jin)的(de)液(ye)相軟件均已具備了(le)強大的(de)數(shu)據處理功能，如(ru)(ru)能庖丁解牛般使用(yong)，便可將此測(ce)定做(zuo)到事(shi)半功倍(bei)、輕松自(zi)如(ru)(ru)。

　　一、 水(shui)相中(zhong)的溶質溶解方(fang)式

　　水相中需溶解(jie)的(de)無機(ji)(ji)鹽和(he)表面活性劑等(deng)固體溶質，強烈建(jian)議采用加熱法，不建(jian)議采用振(zhen)搖、超聲等(deng)方式(shi)。因此種(zhong)方式(shi)的(de)溶解(jie)，溶質可能處(chu)于“臨界膠團濃度”，其后一旦遇(yu)到某特殊情形(如遇(yu)有機(ji)(ji)溶劑、溫度劇降等(deng))，極易析(xi)(xi)出(chu)(chu)少量結晶;而一旦析(xi)(xi)出(chu)(chu)，便將損傷儀器和(he)色(se)譜柱，呈現泵頭處(chu)析(xi)(xi)出(chu)(chu)“鹽和(he)白粉(fen)”的(de)現象(xiang)。

　　二、 流動相的配(pei)制(zhi)與使用(yong)

　　1. 恒度洗脫

　　一(yi)(yi)定(ding)是將水相(xiang)(xiang)與(yu)有機(ji)相(xiang)(xiang)混合后、抽濾(使用(yong)混合型過濾膜)，用(yong)一(yi)(yi)個(ge)(ge)管(guan)路(如A管(guan))泵入(ru)儀器，這是使用(yong)的一(yi)(yi)個(ge)(ge)原則性問題!切勿因(yin)(yin)節(jie)約有機(ji)相(xiang)(xiang)、便于摸索色譜條件(jian)等原因(yin)(yin)而使用(yong)兩個(ge)(ge)管(guan)路(一(yi)(yi)個(ge)(ge)純水相(xiang)(xiang)、一(yi)(yi)個(ge)(ge)純有機(ji)相(xiang)(xiang))抽入(ru)儀器，即(ji)便配制了脫氣機(ji)。因(yin)(yin)此種(zhong)情形極(ji)易造(zao)成水相(xiang)(xiang)中的鹽(yan)和表面活性劑少量析出。

　　剩余(yu)流(liu)動相完全(quan)可(ke)繼續使用(yong)，密封后(hou)放置陰涼處;待下次試驗時與新配制的(de)流(liu)動相混(hun)合(he)后(hou)抽濾即可(ke)。無(wu)需擔(dan)心發霉、無(wu)機鹽析出、揮(hui)發、比例不準等問題(ti)，這些(xie)皆為疑(yi)神疑(yi)鬼。實踐是檢驗真理的(de)唯(wei)一標準!實踐吧~

　　2. 梯度洗脫

　　流(liu)動相(xiang)(xiang)(xiang)配制最(zui)為(wei)(wei)科學(xue)的(de)方(fang)式(shi)是：A相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)高(gao)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)水(shui)相(xiang)(xiang)(xiang)-低(di)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)有機相(xiang)(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)低(di)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)水(shui)相(xiang)(xiang)(xiang)-高(gao)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)有機相(xiang)(xiang)(xiang)(英國藥典幾乎均(jun)如此);其次為(wei)(wei)：A相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)高(gao)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)水(shui)相(xiang)(xiang)(xiang)-低(di)比(bi)(bi)例(li)(li)的(de)有機相(xiang)(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)有機相(xiang)(xiang)(xiang);最(zui)不科學(xue)的(de)為(wei)(wei)：A相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)水(shui)相(xiang)(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)有機相(xiang)(xiang)(xiang)，如既有質量標(biao)準采(cai)用了此種方(fang)式(shi)，強烈建議(yi)改為(wei)(wei)第二種或第一種方(fang)式(shi)，否則(ze)基線漂移(yi)嚴重，難以進(jin)行穩(wen)定的(de)雜(za)質檢測(ce)。

　　梯度洗脫結(jie)束后，強烈建議經(jing)5分鐘(zhong)回到初(chu)始狀態(tai)，再平衡(heng)5分鐘(zhong)后開(kai)始下一針測定。這(zhe)10分鐘(zhong)的穩定極(ji)為關鍵(jian)。切勿短時(shi)間內(nei)回到初(chu)始狀態(tai)，此舉對儀(yi)器損傷較(jiao)大。

　　三、 色譜柱(zhu)的安裝(zhuang)

　　標準SOP應(ying)為：取A管路放(fang)入流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)瓶中→擰松泵頭(tou)(tou)→流(liu)(liu)(liu)速(su)由0ml/min逐(zhu)級(ji)升(sheng)至(zhi)10ml/min，觀(guan)察尾液是否呈(cheng)瀑布狀(zhuang)流(liu)(liu)(liu)出，持續10秒(miao)(miao)→擰緊泵頭(tou)(tou)→流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)呈(cheng)拋射狀(zhuang)從安(an)裝色(se)譜柱(zhu)的一端(duan)噴出，觀(guan)測是否呈(cheng)拋物線狀(zhuang)，持續5秒(miao)(miao)→流(liu)(liu)(liu)速(su)逐(zhu)級(ji)降至(zhi)1.0ml/min →安(an)裝色(se)譜柱(zhu)，待20秒(miao)(miao)后，流(liu)(liu)(liu)動相(xiang)(xiang)從色(se)譜柱(zhu)另一端(duan)呈(cheng)泉(quan)水狀(zhuang)涌出，安(an)裝另一頭(tou)(tou)→手握(wo)兩端(duan)，擰緊。

　　以(yi)上安裝順序(xu)遵循的是：逐級排放氣泡(pao)和(he)儀器(qi)內存留的洗液，使得安裝后氣泡(pao)極難(nan)混入。本(ben)人曾(ceng)試(shi)驗梯度(du)洗脫連續一周(zhou)，第一針與最后一針主(zhu)成分保留時間相差(cha)在6秒以(yi)內。

　　四、 試(shi)驗后色譜柱(zhu)的清(qing)洗

　　1. 最為常用(yong)的C8柱(zhu)、C18柱(zhu)

　　1.1 流動(dong)相僅為乙腈-水(shui)或甲醇-水(shui)時

　　繼續沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗時溫度，即可。

　　1.2 水相中有無機鹽、表面活(huo)性劑或三乙胺、高(gao)氯(lv)酸等物質時(shi)

　　先采用(yong)純(chun)水(或含有2%甲(jia)醇)，沖洗A管(guan)路(試(shi)驗(yan)采用(yong)哪個管(guan)路，就要(yao)從頭(tou)到尾沖洗該管(guan)路)，時間(jian)30分鐘(如流動相中有表面活性劑，適當增加(jia)時間(jian))，流速(su)1.0ml/min，柱(zhu)溫(wen)可較試(shi)驗(yan)溫(wen)度高出5~10℃;隨后更換成20%甲(jia)醇再沖洗30分鐘，流速(su)1.0ml/min，柱(zhu)溫(wen)箱加(jia)熱裝置關(guan)閉。結(jie)束后取下(xia)色譜柱(zhu)放置陰涼(liang)處。

　　很多同仁其后采用(yong)(yong)高比(bi)例的甲(jia)醇(chun)沖洗，實屬畫蛇添足，導致殘余的有機(ji)相中水相遇到(dao)高比(bi)例的甲(jia)醇(chun)后析出少量鹽和表面活性(xing)劑，從而在泵頭上、色(se)譜柱中析出，也(ye)導致了色(se)譜柱壽命(ming)大為(wei)縮短。本人曾使用(yong)(yong)過一(yi)根約2000元的色(se)譜柱，正(zheng)著用(yong)(yong)了四年、倒著用(yong)(yong)了兩年(倒著用(yong)(yong)測非有關物(wu)質(zhi))。

　　2. 其他類(lei)型色譜柱

　　查詢獲(huo)取如(ru)何科(ke)學合理地使用與清洗保存該(gai)類型色譜柱的方法，切勿盲動(dong)，否則導致色譜柱性能急(ji)劇下降。

　　五、 試驗(yan)順序

　　工(gong)作流程(cheng)應如下進行：

　　(1) 0~2小時 配制流動相(xiang)、對(dui)照品和(he)供(gong)試品溶液等，切勿(wu)催促昨日(ri)試驗同事。

　　(2) 2~3小(xiao)時(shi) 采用A管路(lu)注入(ru)流動相(B、C、D管路(lu)從來不用，除非梯度洗脫才用到B管路(lu))，平衡1小(xiao)時(shi)。如(ru)流動相中有表面活(huo)性劑，建議前一晚小(xiao)流速(su)過夜，第二天上班后(hou)將(jiang)流速(su)增至1.0ml/min，平衡1小(xiao)時(shi)后(hou)即可開始做試(shi)驗。

　　(3) 3~5小時(shi) 測定(ding)空白(bai)溶劑，一(yi)定(ding)要(yao)做(zuo)到基線不漂移后方可(ke)(ke)開(kai)始測定(ding)。所謂“不漂移”，通(tong)常(chang)系(xi)指以1.0%自身(shen)對照(zhao)溶液主成分(fen)峰(feng)高約20%高度來設(she)(she)定(ding)的視野范(fan)圍觀(guan)察所得，切不可(ke)(ke)設(she)(she)定(ding)得過小，使得雜質(zhi)峰(feng)顯得很突兀、基線抖動得很厲害，弄得人(ren)很擔心(xin)。

　　(4) 5~8小時 配制完(wan)所有樣(yang)品，預試了對照溶(rong)液和(he)供試品溶(rong)液，設(she)(she)定(ding)好自動進樣(yang)程序，程序最后一針設(she)(she)定(ding)為小流速過夜(ye)，紫外燈關閉。切勿設(she)(she)定(ding)為切換成(cheng)B管路洗脫，此(ci)舉(ju)得不償失(shi)!

　　(5) 8~24小時 放(fang)心回家，讓儀器自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)，除非(fei)不(bu)穩定(ding)的樣(yang)品(配制一(yi)份測定(ding)一(yi)針(zhen))。充(chong)分(fen)利用下班后的16小時，做到從容(rong)不(bu)迫(po)、鎮定(ding)自(zi)若。如(ru)單位還無自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)裝置(zhi)，強(qiang)烈建議向領導申請(qing)購買，因一(yi)臺(tai)自(zi)動(dong)媲美三臺(tai)手動(dong)。

　　(6) 第二天0~0.5小時 檢查并(bing)計算昨晚試驗結果，如發現不良記(ji)錄，將流速(su)增至1.0ml/min，平衡30分(fen)鐘后，測定重新(xin)配(pei)制的(de)該份(fen)樣品即可(同(tong)時回校對照一針)。無(wu)需全部重新(xin)測定，不要過度謹(jin)小慎微。

　　(7) 第二(er)天0.5~2.0小時 如上沖洗色譜柱(zhu)，交(jiao)給其后試驗同事。

　　六、 液相軟件的使用

　　現今幾(ji)大主(zhu)流品牌的硬件(jian)性(xing)能已相差無幾(ji)，主(zhu)要還是軟件(jian)的設計是否能使操作者得心應手、隨心所欲。

　　強烈建議掌(zhang)握各(ge)軟件(jian)的批處理(li)、編輯樣(yang)品處理(li)模板等功能，做(zuo)到一勞永(yong)逸(yi)，讓(rang)軟件(jian)充分為工作所(suo)用。“磨刀不誤砍柴工”：本人(ren)曾用20分鐘完成500個(ge)溶出度樣(yang)品數據處理(li)，做(zuo)出溶出曲線(xian)圖。體會(hui)一下~

　　七、 其他

　　1. 如需(xu)使用正相系(xi)統，一定要(yao)單獨采(cai)(cai)用一臺儀(yi)器(如二手的、較為破舊的、淘(tao)汰的等)，切勿采(cai)(cai)用異丙醇轉換，此舉對儀(yi)器損傷(shang)極大，等于“自(zi)殺”!

　　2. 正相所使用(yong)的流動相(如正己烷、環己烷等)，無需抽濾，混勻超(chao)聲后即(ji)可使用(yong)，“大道至簡”。

　　3. 柱(zhu)溫(wen)箱必(bi)須配制。如欲經濟，可(ke)購買國產(chan)柱(zhu)溫(wen)箱。