化學實驗室檢測方法的驗證與確認的參數
2018-07-26
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檢測方法的(de)(de)驗證與確認的(de)(de)參數
化(hua)學(xue)(xue)檢測的(de)(de)(de)(de)對(dui)象即分析(xi)的(de)(de)(de)(de)目標(biao)(biao)(biao)化(hua)合物(wu)按照(zhao)性質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)可(ke)以(yi)分為(wei)不得(de)檢出(chu)(chu)的(de)(de)(de)(de)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi) (禁用物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)) 、限(xian)制使(shi)用的(de)(de)(de)(de)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi) (已制定(ding)最高(gao)允許殘留限(xian)量(liang)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)) 和(he)無限(xian)制使(shi)用物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)這(zhe)三(san)類(lei)。因此, 在對(dui)化(hua)學(xue)(xue)檢測方(fang)(fang)法(fa)進行(xing)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)和(he)確(que)認(ren)(ren)過程(cheng)中制訂相(xiang)(xiang)關技(ji)(ji)術(shu)指(zhi)標(biao)(biao)(biao)的(de)(de)(de)(de)試(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)方(fang)(fang)案(an)及(ji)結果評價時, 也應充分考(kao)慮這(zhe)三(san)類(lei)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)不同特(te)性來控制執行(xing)。國際部分技(ji)(ji)術(shu)組織針對(dui)化(hua)學(xue)(xue)檢測實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)與確(que)認(ren)(ren)都提出(chu)(chu)了相(xiang)(xiang)關的(de)(de)(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)要(yao)求(qiu), GB/T27404-2008標(biao)(biao)(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)等文件(jian)也給(gei)出(chu)(chu)方(fang)(fang)法(fa)確(que)認(ren)(ren)與驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)可(ke)參考(kao)的(de)(de)(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)參數。從(cong)方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)與確(que)認(ren)(ren)參數的(de)(de)(de)(de)科學(xue)(xue)性和(he)有效性論證(zheng)角度看, 化(hua)學(xue)(xue)檢測方(fang)(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)證(zheng)的(de)(de)(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)指(zhi)標(biao)(biao)(biao)可(ke)分為(wei)方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲(qu)線、回(hui)(hui)收(shou)率(lv)、精密度、準(zhun)(zhun)(zhun)確(que)度 (正確(que)度) 試(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)。而非標(biao)(biao)(biao)方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)確(que)認(ren)(ren)技(ji)(ji)術(shu)指(zhi)標(biao)(biao)(biao)除了方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)曲(qu)線、回(hui)(hui)收(shou)率(lv)、精密度、準(zhun)(zhun)(zhun)確(que)度 (正確(que)度) 試(shi)(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)以(yi)外, 還需要(yao)進行(xing)方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)特(te)異性、耐用性和(he)測量(liang)不確(que)定(ding)度評估(gu)等確(que)認(ren)(ren)。
1 方(fang)法(fa)的校準曲線
實驗室認可的實驗室應確定檢測方法校準曲線的數學方程以及校準曲線的工作范圍, 濃度范圍盡可能覆蓋一個數量級, 至少作5個點 (不包括空白) 。對于篩選方法 (即指定性方法或半定量方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.98, 對于確證方法 (即能準確定量的方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準曲線的線性范圍內。
2 方法的回收率(lv)
方(fang)法(fa)的(de)(de)(de)回(hui)收(shou)(shou)率代表了測試人員(yuan)操作檢測過程所獲得測試結果的(de)(de)(de)準確(que)性。考慮到被測物(wu)的(de)(de)(de)濃度(du)水(shui)平(ping)會(hui)影響(xiang)到回(hui)收(shou)(shou)率試驗結果的(de)(de)(de)高低, 因此, 在進(jin)行(xing)(xing)(xing)方(fang)法(fa)的(de)(de)(de)回(hui)收(shou)(shou)率驗證試驗時, 對(dui)(dui)于(yu)禁用(yong)物(wu)質, 回(hui)收(shou)(shou)率應在方(fang)法(fa)測定低限 (LOD) 、兩倍(bei)方(fang)法(fa)測定低限和十倍(bei)方(fang)法(fa)測定低限進(jin)行(xing)(xing)(xing)三(san)(san)水(shui)平(ping)試驗;對(dui)(dui)已(yi)制定最(zui)高殘留限量(liang)MRL的(de)(de)(de)最(zui)大化學殘留量(liang), 回(hui)收(shou)(shou)率應在方(fang)法(fa)LOD、MRL、選一合適點進(jin)行(xing)(xing)(xing)三(san)(san)水(shui)平(ping)試驗;對(dui)(dui)于(yu)未(wei)制定MRL的(de)(de)(de), 回(hui)收(shou)(shou)率應在方(fang)法(fa)LOD、常見限量(liang)指(zhi)標、選一合適點進(jin)行(xing)(xing)(xing)三(san)(san)水(shui)平(ping)試驗。每一水(shui)平(ping)做雙(shuang)平(ping)行(xing)(xing)(xing)。可參考表1給出的(de)(de)(de)數據進(jin)行(xing)(xing)(xing)回(hui)收(shou)(shou)率結果的(de)(de)(de)評價。
表1.回收率可接受范圍
3 方(fang)法的精密度
方(fang)法(fa)的(de)(de)(de)精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)代表了測(ce)試(shi)人員(yuan)操作檢測(ce)過程所獲(huo)得(de)(de)測(ce)試(shi)結(jie)果的(de)(de)(de)穩定水平(ping)。在(zai)進(jin)行方(fang)法(fa)的(de)(de)(de)精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)驗(yan)證(zheng)試(shi)驗(yan)時, 對(dui)于(yu)禁用物(wu)質, 精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)試(shi)驗(yan)應(ying)在(zai)LOD、兩(liang)倍(bei)LOD和十(shi)倍(bei)LOD三(san)個(ge)水平(ping)進(jin)行;對(dui)于(yu)已制(zhi)定MRL的(de)(de)(de), 精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)試(shi)驗(yan)應(ying)在(zai)LOD、MRL、選一(yi)(yi)合適點(dian)三(san)個(ge)水平(ping)進(jin)行;對(dui)于(yu)未制(zhi)定MRL的(de)(de)(de), 精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)試(shi)驗(yan)應(ying)在(zai)LOD、常見限量指標(biao)、選一(yi)(yi)合適點(dian)三(san)個(ge)水平(ping)進(jin)行。每(mei)一(yi)(yi)濃度(du)(du)(du)(du)(du)(du)水平(ping)的(de)(de)(de)重復(fu)測(ce)定次(ci)數(shu)>6。精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)測(ce)試(shi)的(de)(de)(de)結(jie)果可(ke)通過實驗(yan)室內(nei)的(de)(de)(de)變異系(xi)數(shu) (CV=標(biao)準(zhun)偏(pian)差/平(ping)均值) 來表達, 標(biao)準(zhun)偏(pian)差s可(ke)通過貝塞爾(er)Bessel公式(shi)計算得(de)(de)到, 并可(ke)參(can)考(kao)表2給出(chu)的(de)(de)(de)數(shu)據進(jin)行精(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)(du)(du)結(jie)果的(de)(de)(de)評價。
表2.實驗室內變異系數
4 方法的準確度
方法(fa)的(de)準(zhun)確(que)度(du)又可稱為方法(fa)的(de)正(zheng)確(que)度(du), 指的(de)是重復分析標(biao)準(zhun)物質 (實物標(biao)樣(yang)) 或水平(ping)測試(shi)樣(yang)品, 測定(ding)的(de)含量經回收率校正(zheng)后, 得出測定(ding)值與真值的(de)偏差范(fan)圍(wei)。可參(can)考(kao)表3給(gei)出的(de)數據進行準(zhun)確(que)度(du)結果的(de)評價(jia)。
表3.實驗室內變異系數
5 方法的特(te)異性
實驗室(shi)(shi)在使用(yong)非標方(fang)(fang)法(fa)、實驗室(shi)(shi)設計 (制定(ding)) 的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)、超出其預定(ding)范圍使用(yong)的(de)(de)(de)(de)標準方(fang)(fang)法(fa)、擴(kuo)充和修改過的(de)(de)(de)(de)標準方(fang)(fang)法(fa)時, 有必要(yao)對使用(yong)方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)特異(yi)(yi)性進行(xing)確(que)認, 因(yin)為僅(jin)僅(jin)基于色譜(pu)分析的(de)(de)(de)(de)技(ji)術(shu)手段(duan)不(bu)能(neng)準確(que)地區分同(tong)一分子量(liang)的(de)(de)(de)(de)物(wu)質 (同(tong)分異(yi)(yi)構(gou)體) 。對于能(neng)夠準確(que)定(ding)量(liang)檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)(de)方(fang)(fang)法(fa)要(yao)保證檢(jian)測(ce)的(de)(de)(de)(de)結(jie)果準確(que)性, 避免異(yi)(yi)構(gou)體結(jie)果的(de)(de)(de)(de)誤(wu)判, 因(yin)此就應該根據(ju)待(dai)測(ce)物(wu)的(de)(de)(de)(de)化學結(jie)構(gou)信息(xi)、使用(yong)分子光譜(pu)等技(ji)術(shu)才能(neng)滿足方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)特異(yi)(yi)性。方(fang)(fang)法(fa)的(de)(de)(de)(de)特異(yi)(yi)性確(que)認可采(cai)用(yong)如下的(de)(de)(de)(de)技(ji)術(shu)手段(duan):
1) 氣(qi)相(xiang)色(se)譜分析(xi)結果再用(yong)氣(qi)相(xiang)色(se)譜質譜分析(xi)技術確證(zheng);
2) 液(ye)相色譜(pu)分析結(jie)果再用液(ye)相色譜(pu)質譜(pu)分析技術確證;
3) 免(mian)疫親和色(se)譜分(fen)析結果再(zai)用氣相色(se)譜質譜分(fen)析技術確證(zheng);
4) 氣相(xiang)色譜分(fen)析(xi)結果再用紅外(wai)光譜分(fen)析(xi)技術(shu)確(que)證;
5) 液相色譜分析結果再用免(mian)疫層(ceng)析分析技(ji)術確(que)證。
6 方法的抗干擾性和耐(nai)用性
實(shi)驗室采(cai)用的(de)非標方(fang)(fang)法應具(ju)有(you)對測(ce)試過(guo)程(cheng)中(zhong)可影響測(ce)試結果因素的(de)抗干擾能(neng)力(li), 當測(ce)試條(tiao)件發生(sheng)細小(xiao)變動時, 方(fang)(fang)法可具(ju)有(you)一定(ding)的(de)保持(chi)測(ce)試結果不受影響的(de)耐受程(cheng)度, 方(fang)(fang)法的(de)技術條(tiao)件應滿足最大(da)的(de)波動影響, 并且設備、試劑、操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)等應具(ju)有(you)盡可能(neng)廣泛的(de)適用性和(he)耐用性, 不宜具(ju)有(you)嚴苛的(de)要求。
實驗室(shi)(shi)只(zhi)有做好方(fang)法(fa)(fa)驗證和(he)方(fang)法(fa)(fa)確(que)認, 才能(neng)用(yong)測(ce)試(shi)數據真實地證明(ming)實驗室(shi)(shi)使(shi)用(yong)標準方(fang)法(fa)(fa)的(de)(de)操作(zuo)能(neng)力, 證明(ming)所(suo)使(shi)用(yong)的(de)(de)非標方(fang)法(fa)(fa)具(ju)有的(de)(de)科(ke)學性(xing)、適用(yong)性(xing)、準確(que)性(xing)和(he)有效性(xing), 達到確(que)保實驗室(shi)(shi)檢測(ce)結果(guo)準確(que)無(wu)誤的(de)(de)目的(de)(de)。
