1.在重(zhong)蒸(zheng)酚中為什么加入0.1%的8-羥基喹(kui)啉(lin)及少量巰基乙(yi)醇(chun)?

　　保存在冰箱中的(de)酚(fen)(fen)，容(rong)易被空(kong)氣氧(yang)化(hua)(hua)而變成(cheng)粉(fen)紅色(se)，這樣的(de)酚(fen)(fen)容(rong)易降解DNA，一般不可以使用。為(wei)了(le)防止酚(fen)(fen)的(de)氧(yang)化(hua)(hua)，可加(jia)入(ru)0.1%的(de)8-羥基喹啉(lin)及少量巰基乙醇。8-羥基喹啉(lin)是帶有(you)淡(dan)黃色(se)的(de)固體粉(fen)沫，不僅能抗氧(yang)化(hua)(hua)，并在一定(ding)程(cheng)度上(shang)能抑制DNase的(de)活(huo)性。

　　2.如何將不同(tong)構型的質粒DNA區(qu)別開?

　　由(you)于(yu)不(bu)同(tong)(tong)構型的(de)(de)DNA在瓊脂糖凝(ning)膠電泳(yong)(yong)中(zhong)的(de)(de)遷移率不(bu)同(tong)(tong)，cccDNA的(de)(de)泳(yong)(yong)動(dong)速度最快(kuai)，通過凝(ning)膠電泳(yong)(yong)方(fang)法(fa)可將不(bu)同(tong)(tong)構型的(de)(de)DNA區(qu)別開。

　　3.用酚-氯仿抽提(ti)細(xi)胞基因組DNA時，通常要在酚-氯仿中加少許異戊醇，為什么?

　　異(yi)戊(wu)醇可以降(jiang)低表面張力，從(cong)而減少氣泡產生(sheng)。另(ling)外，異(yi)戊(wu)醇有助于分相，使(shi)離心后的(de)上層(ceng)含DNA的(de)水相、中間的(de)變性蛋(dan)白相及下層(ceng)有機(ji)溶劑相維持(chi)穩定。

　　4.用(yong)乙醇沉淀DNA時，為(wei)什么加入單價的陽(yang)離子?

　　用(yong)乙醇沉淀DNA時，通常(chang)要在溶液中加入單價的陽離子(zi)，如(ru)NaCl或(huo)NaAc，Na+中和DNA分(fen)子(zi)上的負電荷(he)，減少DNA分(fen)子(zi)之間的同性(xing)電荷(he)相斥力，而易于聚集沉淀。

　　5.在提(ti)取RNA時經(jing)常使用異硫氰(qing)酸胍，有什么作用?

　　RNA是一種極易降解的核酸(suan)(suan)分(fen)子。高(gao)濃度(du)強(qiang)變性劑異硫氰酸(suan)(suan)胍使(shi)(shi)細胞(bao)結構迅速被破壞(huai)，使(shi)(shi)RNA從細胞(bao)中(zhong)釋放出來。同時高(gao)濃度(du)異硫氰酸(suan)(suan)胍還使(shi)(shi)細胞(bao)內的RNA酶失(shi)活，使(shi)(shi)釋放出的RNA不被降解。

　　6.蛋(dan)白印跡中(zhong)封閉液的作(zuo)用?

　　封閉(bi)液(ye)的作用是封閉(bi)未吸(xi)附蛋白的部(bu)位，以減少(shao)非特異性結合背景的影響。常用的封閉(bi)液(ye)有脫脂奶粉、小牛(niu)血清等。

　　7.DNA通常保存在什(shen)么緩沖液中?

　　采(cai)用TE緩(huan)沖液，Tris-HCl的(de)緩(huan)沖系(xi)統(tong)，加入EDTA可(ke)以螯(ao)合二價(jia)金(jin)屬離子進而抑制依賴(lai)于二價(jia)金(jin)屬離子的(de)DNA酶的(de)活性，對DNA起到保護作用。

　　8.在酶切反(fan)應緩沖(chong)液(ye)中為什么加(jia)入(ru)BSA?

　　通過提(ti)高溶液中(zhong)蛋白質的(de)濃度，對酶起保護(hu)作用。

　　9.簡單的克隆載體(ti)必(bi)需包括什么?

　　復制起點(dian);選擇標記：主要(yao)是抗性基因;多克隆位點(dian)：便于外源DNA的插入。

　　10.用酚抽提細胞(bao)DNA時，有什么作用?

　　使蛋白質變性。

　　11.在(zai)分離(li)DNA時，要使用(yong)EDTA，為什么(me)?

　　EDTA是金屬離子螯(ao)(ao)合劑(ji)，螯(ao)(ao)合二(er)價(jia)離子，抑制核(he)酸酶的活性(xing)。

　　12.在分離DNA過程(cheng)中，造成DNA分子斷裂的因素有哪些(xie)?

　　核酸酶降解(jie)(jie);化學降解(jie)(jie);物理剪切。

　　13.使(shi)用離(li)心機(ji)應注意(yi)什(shen)么?

　　首先應(ying)該根據自己的實驗需求選(xuan)擇合適的離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)機和(he)轉(zhuan)(zhuan)子(zi)以及(ji)離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)管(guan)，使用離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)機時的工(gong)作(zuo)轉(zhuan)(zhuan)速不應(ying)該超(chao)過(guo)離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)機、轉(zhuan)(zhuan)子(zi)以及(ji)離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)管(guan)的最(zui)大(da)允許轉(zhuan)(zhuan)速。離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)前注(zhu)意嚴格平(ping)衡樣品(pin)。安(an)裝轉(zhuan)(zhuan)子(zi)和(he)轉(zhuan)(zhuan)子(zi)蓋(gai)要規范、準(zhun)確(que)。離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)時要留人(ren)看(kan)守，發現離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)機異(yi)常應(ying)立即關閉離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)機。離(li)(li)心(xin)(xin)(xin)結束(shu)后要安(an)放好轉(zhuan)(zhuan)子(zi)。

　　14.分子生物學實(shi)驗(yan)室常用的滅菌(jun)方(fang)法有哪些(xie)?

　　高壓(ya)蒸汽滅(mie)(mie)菌(jun)、干熱滅(mie)(mie)菌(jun)、化(hua)學(xue)藥劑消毒、過(guo)濾除菌(jun)。

　　15.使(shi)用(yong)移(yi)液器有哪些注意事項(xiang)?

　　垂直吸液、慢(man)吸慢(man)放;選(xuan)擇合適的(de)量程范圍，不(bu)能(neng)超過量程使用;選(xuan)擇與移(yi)液器匹配(pei)的(de)槍頭(tou)(tou)，安裝槍頭(tou)(tou)時不(bu)要用力太猛;移(yi)液器每(mei)日用完(wan)后，應旋到(dao)最大刻度。